日本研发出简易快速的松材线虫病诊断法

　　国家林业局政府网5月18日讯  据日本独立行政法人森林综合研究所网站2009年6月19日报道，森林综合研究所研发出了比以往方法更加简便和快速的松材线虫病诊断法。该诊断法是利用检测存在于枯死松树内的松材线虫病病原体即松材线虫DNA，进行诊断松材线虫病的一种新方法。该DNA诊断法不像以往诊断方法那样烦琐，无需具备鉴定线虫的专业技术和特殊器材，所以不是专业技术人员也可以很容易地进行诊断。松材线虫病给日本的森林造成极大危害，该诊断法的研发成功可以作到早发现、早防治。目前，该诊断法正在申请专利。
　　DNA诊断法分为以下3个步骤：①从松材木片中提取DNA。首先，将部分木片放入装有DNA提取液的试管中，在约55℃温度下保温20分钟，再在94℃以上温度下保温10分钟。根据此操作，松材线虫的DNA可以在提取液中溶出；②检测松材线虫DNA。将第1步骤得到的部分DNA提取液放入装有检测液的试管中，在约63℃温度下保温60分钟。此法即为利用LAMP法（Loop-mediated isothermal amplification的简称。即在一定温度条件下使目标DNA增加的方法）的DNA检测法，只有松材线虫的DNA存在时才会发生特异反应。③根据溶液颜色目视判断有无反应。如果液体呈绿色荧光色为阳性，即松材木片中存在松材线虫DNA；如果液体没有变化则为阴性，即松材木片中不存在松材线虫DNA。
　　该DNA诊断法的特点是简便、快速。根据液体颜色，任何人都可以判断阳性或阴性；以往的诊断方法需要2天而新方法只需要90分钟，而且不反应松材线虫以外的生物DNA，因此无须担心误鉴定出近缘的其他线虫种。
　　这一诊断新技术经专业研究机构、都道府县的林业机构、森林组合及树木医等应用，证明效果良好。该技术从6月19日起由“日本基因”株式会社正式出售。